本科期间系统学习了各种药物知识,并具有一定的动物解剖及药理实验实践经验,了解各种制剂的生产工艺,经历过多种化学实验操作,动手能力强.实习期间认真学习,掌握了许多药理实验知识,为实验操作打下了坚实的基础. 硕士期间参与研究的甘蔗花叶病项目由国家自然基金(30571170)和福建省科学基金(2006J0003)支持.以《SrMV-P1基因的原核表达及多克隆抗体的制备》为研究题目,该研究是以甘蔗花叶病毒P1基因作为研究对象,其编码的蛋白是一种新型的功能未知的蛋白,不存在商品化的检测试剂盒,为了制备抗体用于预期标本的检测,在原核系统中对其进行表达,经过对PGEX-4T-3,PET-28a,PET-29a和PET-32a载体的筛选,最后选定PET-32a作为载体来获得大量高效表达的重组蛋白,由于该重组蛋白形成包涵体,故在多次摸索中确立了比较合适的条件破碎包涵体,从而获得可溶性蛋白,经过柱纯化获得高纯度蛋白作为抗原来免疫动物制备多克隆抗体,从而为甘蔗花叶病毒的快速检测及研究P1与其他花叶病毒基因片断之间相互作用的生物学意义提供有用的实验工具. 在此过程中,我也熟练掌握了一系列分子生物学实验技术,如基因克隆,载体构建,蛋白质的表达,纯化和分析,ELISA,Western blotting等. 同时亦加入转基因课题组,通过基因枪轰击方法分别将P1,Hcpro,p3等基因转入福农91-4621和福农95-1702甘蔗愈伤组织中,经过对愈伤组织生长,分化,生根3个阶段的培养基进行甘露糖浓度梯度筛选,获得了一批抗性再生植株,经过PCR和Southern杂交检测,最终获得了P1和Hcpro的转基因植株. 实验技术:组培技术,基因枪转导,基因克隆,DNA和RNA提取,引物设计,载体构建,原核表达,真核表达,遗传转化相关技术,PCR扩增,RT-PCR,Q-PCR,SDS-PAGE电泳,Southern杂交,Westen blot,细胞破碎以及蛋白柱纯化等等. |
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